论文鸡源乳杆菌分离鉴定益生性能是关于乳杆菌方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关复方啫酸乳杆菌片功效论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
摘 要：从健康的蛋鸡肠道内分离鉴定了一株耐酸耐胆盐乳杆菌SL3菌株.该菌可产生一种对大肠杆菌（E.coli）、鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）、金 葡萄球菌（S.aureus）和溶壁微球菌（M.lysodeikticus）均具有抑制作用的类细菌素,且具有良好的肠道黏附能力和生物安全性,可作为微生态制剂的优良菌种使用.
关键词：乳杆菌；分离鉴定；益生菌；类细菌素
中图分类号：S852.6 文献标识码：A 文章编号：1672-4437（2015）01-0066-06
自1928年抗生素发明以来,其用途越来越广泛,甚至已经达到了滥用的程度,尤其是在畜禽养殖业.尽管有关部门三令五申禁用某些抗生素,并对一些允许添加的抗生素要求严格限量.但是养殖业主为了减少畜禽的发病率和死亡率,不断在饲料中超标添加各种抗生素和激素.抗生素的滥用导致微生态失衡,大量耐药菌株不断产生,给人类的健康带来严重的威胁.食品安全尤其是畜禽产品的安全问题是摆在政府监管部门的一个难题,同时也是人们日常消费不得不去面对的问题.
益生菌制剂以其无毒、无残留、无耐药性、低成本,并能有效补充畜禽消化道内的有益微生物,调节肠道微生态平衡等优点,被认为是抗生素的理想替代品而使用[1].乳杆菌（Lactobacillus）是动物机体内正常的生理菌群之一.乳杆菌可粘附于肠道粘膜细胞上,一方面对肠道粘膜有占位性保护作用,另一方面可刺激肠道局部的免疫反应.本研究从健康蛋鸡的肠道中分离了一株益生乳杆菌SL3菌株,并对其抑菌特性、肠道黏附能力及生物安全性等益生特性进行了研究.认为乳杆菌SL3菌株可作为微生态制剂的优良菌株使用.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 样品来源 健康的10周龄罗曼褐蛋鸡.
1.1.2 培养基和试验试剂配制 试验所使用的MRS培养基按照陈天寿的《微生物培养基的制造和应用》[2]配制；各种生化培养基和试验试剂均按照赵斌的《微生物学实验》[3]配制.
1.1.3 指示菌：大肠杆菌（E.coli）、金 葡萄球菌（S.aureus）、鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimur ium）、溶壁微球菌（M.lysodeikticus）由华中农业大学微生物实验室提供；
1.1.4 试验所用试剂均为市售的分析纯.
1.1.5 试验所用主要仪器设备：离心机（Eppendorf 5415D）、高压细胞破碎机（JNBIO）、生物安全柜（BIOBASE BSC-1100IIB2-X）等.
1.2 方法
1.2.1 乳杆菌的分离 将健康的10周龄罗曼褐蛋鸡颈部放血处死,无菌操作刮取小肠黏膜1g,经稀释后涂布在MRS琼脂平板上,37℃培养48h后挑取大小、颜色、形状、边缘及在培养基表面位置各异的单菌落,并通过在MRS琼脂培养基上划线得到纯培养.经革兰氏染色镜检,挑选染色结果为G+的不产芽孢的杆状菌株,再次划线纯化并保存菌种.
1.2.2 形态学及生理生化鉴定 将挑选出来的菌种依次从形态、生理生化特性、代谢产酸等方面进行鉴定,具体方法参照《伯杰氏细菌鉴定手册（第八版）》[4].
1.2.3 耐酸性试验 将培养24h的菌液接种于pH值分别为2.0、3.0、4.0、6.8（CK）的MRS液体培养基中,37℃分别处理1h、2h、3h,通过处理前后活菌计数结果计算出细菌存活率.
1.2.4 胆盐耐受性试验 将培养24h的菌液接种于胆盐浓度分别为0（CK）、0.05%、0.10%、0.20%、0.30%、0.40%的MRS液体培养基中,37℃处理3h后,平板菌落计数,筛选出对酸和胆盐耐受能力均较强的菌株进行后续相关试验.
1.2.5 抑菌试验 将指示菌大肠杆菌（E.coli）、金 葡萄球菌（S.aureus）、鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）、溶壁微球菌（M.lysodeikticus）培养物分别均匀涂抹在NB平板上, 用直径6mm无菌打孔器打孔并封底.将乳杆菌的24h发酵培养液在5000rpm离心5min,取上清液备用；将乳杆菌的24h液体培养液进行细胞破碎,取细胞破碎液备用；分别以发酵上清液、细胞破碎液、发酵培养液为实验样本,以MRS液体培养基为对照, 37℃培养16h,观察有无抑菌圈并测量其直径,每个样本重复3次,计算平均值.
1.2.6 抑菌物质的确定
1.2.6.1 酸性抑制作用实验 将乳杆菌SL3菌株培养24h的发酵上清液、乳酸和盐酸分别调节pH至4.5后, 以大肠杆菌（E.coli）、金 葡萄球菌（S.aureus）、鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）、溶壁微球菌（M.lysodeikticus）为指示菌,进行抑菌试验.
1.2.6.2 过氧化氢抑制作用实验 取经过氧化氢酶处理后的SL3菌株发酵上清液,以大肠杆菌（E.coli）、金 葡萄球菌（S.aureus）、鼠伤寒沙门氏菌（S.typhimurium）、溶壁微球菌（M.lysodeikticus）为指示菌,进行抑菌试验.
1.2.6.3 蛋白酶处理实验 在3份乳杆菌SL3菌株培养24h的发酵上清液中分别按照1mg/ml的量加入蛋白酶K、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶,37℃处理1h,然后用各处理后的发酵上清液进行抑菌试验.
1.2.7肠道黏附能力试验 菌种在含20μl/mL的3H胸腺嘧啶核苷NB培养基中,37℃厌氧培养48h.以实验室保存的 Bacillus subtilis stain B9 为对照菌株, 37℃培养24h,其余操作均和试验菌株一致.将培养的细菌于4000rpm离心10min,用含0.1%（W/V）叠氮钠的HH（Hepes-Hanks, Buffer： 10mmol/LHEPES,pH7.4）液洗涤后,悬浮在HH液中.将细菌的光密度调节至（1-2）×108CFU/mL.
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参考文献：
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