论文橡胶树根际2株产ACC脱氨酶促生菌分离鉴定是大学硕士与本科橡胶树毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写橡胶树的作用方面论文范文。
摘 要 橡胶树死皮是制约天然橡胶产量的重要因素,其发生和刺激割胶时乙烯利用量过度有关,具有1-氨基环丙烷-1-羧酸（1-aminocyclopropane-1-carboxylate,ACC）脱氨酶活性的土壤微生物可以分解利用ACC（乙烯前体）来刺激植物生长发育.本研究从橡胶树根际土壤中筛选有助于减轻橡胶树死皮发生,并对其防控有一定应用前景的菌株.本文采集了橡胶树主要种植区（海南、云南和广东）的根际土壤样品,以ACC为唯一氮源进行筛选,共分离橡胶树根际细菌152株,并测定其ACC脱氨酶活性大小,将活性较强（0.226、0.164 U/mg）的2个菌株命名为HBRM-86和HBRM-16；结合常规形态学观察、生理生化特征分析及分子鉴定,将HBRM-86和HBRM-16分别鉴定为产气肠杆菌（Enterobacteraerogenes）和粘质沙雷氏菌（Serratiamarcescens）；测定2株菌株促生潜能,结果发现其具有较好的促生潜力,进一步研究将为死皮防控药物研发提供新的思路.
关键词 橡胶树；根际促生菌；ACC脱氨酶；分离鉴定；促生潜能
中图分类号 S794.1 文献标识码 A
橡胶树死皮（Tapping panel dryness,TPD）是天然橡胶生产中出现的一种割线局部或全部不排胶症状,其在国内外橡胶园发生普遍且危害巨大,发生率在14%～30%之间,局部地区可能高达50%左右[1],已经成为制约天然橡胶产量的主要因素之一.目前关于橡胶树死皮防控的研究主要是物理和化学防治[2-3],生物防治少见报道.关于TPD发生机理的假说国内外有很多[4],而其中蔡磊等[5]提出的“乙烯诱导死皮说”随着乙烯利刺激割胶新割制的全面推行越来越得到认可.有一种具有ACC脱氨酶活性的植物根际促生菌（Plant growth promoting rhizobacteria,PGPR）可以降低乙烯含量,这种PGPR体内含有ACC脱氨酶,将根系分泌物和植物体内合成的ACC作为氮源而利用,因而植物根表ACC浓度降低从而打破了平衡,导致根系ACC分泌量增加,植物体内ACC（乙烯前体物质）水平下降,刺激植物生长发育[6],所以分离橡胶根际具有ACC脱氨酶活性的根际细菌对死皮进行防控是有意义的.
据文献报道有学者从小麦、玉米、豌豆、马铃薯、牧草等多种植物根际土壤中分离到具有促生作用的PGPR,这些菌株可以耐盐、抗旱、耐涝、修复土壤、提高植物抗病能力[7-14].而且大部分PGPR通过分泌维生素、吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid,IAA）、解磷、嗜铁以及利用ACC来促进植物生长[15-16].所以,橡胶树死皮病也有可能通过具有促生作用的PGPR这一生物手段进行防控,目前未见关于橡胶树根际促生菌的相关报道.
本研究以“乙烯诱导死皮”这一假说为切入点,针对橡胶树生物防控这一薄弱环节,从橡胶林根际土壤中筛选出能利用乙烯前体（ACC）为唯一氮源的,能应用于橡胶树死皮防控的菌株,并对其进行深入研究,以期能开发出具有防控橡胶树死皮的生物菌剂或提取其活性物质,为橡胶树死皮防控药物研发提供一条新的途径.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂 ACC购自安耐吉化学；铬天青（CAS）购自上海麦克林生化科技有限公司；磷酸钙购自索莱宝化学；DNA提取试剂购自北京天根生物技术有限公司；分子鉴定所需其他试剂均购自TaKaRa公司,其它试剂均为国产分析纯.
1.1.2 土壤样品 本研究分不同批次采集了云南、海南和广州3个省18个橡胶树林段的根际土壤样品,其中云南5个,广州1个,海南12个；采集土壤样地涵盖8个橡胶树品种,分别是云研77-4、GT1、RRIM600、PR107、热研7-33-97、热研8-79、热研7-20-59和93-114；纬度18°21′36″N～24°9′36″N,经度98°1′12″E～111°22′12″E；海拔91～949 m.采样时间为2014年10月20日到2015年4月1日.
土样采集时,去除根系表面土壤,用无菌水清洗根部,然后剪成1 cm长短.采样时尽量选取细根,剪成合适长度用密封袋装好,4 ℃冰箱保存.取5个1 cm的根加入50 mL无菌水中,浸泡10 min,后轻微震荡处理5 min,制成土壤悬浮液[17].
1.2 方法
1.2.1 产ACC脱氨酶菌株的分离纯化 参考黄盖等[17]的方法从采集的橡胶树根际土样中分离、纯化具有ACC脱氨酶活性的细菌并进行保存.
1.2.2 ACC脱氨酶活性测定 参考Penrose等[18]的方法进行测定.
1.2.3 菌株鉴定 （1）菌株形态特征观察将筛选到的菌株接种在TSB平板上（温度28 ℃）,培养24、48 h后观察菌落形态并采用十字交叉法测量菌落直径大小.
（2）菌株常规鉴定及生理生化特征参照《常见细菌系统鉴定手册》[19]和《伯杰氏细菌鉴定手册》[20]进行分析.
（3）16S rDNA基因序列分析及系统发育树的构建参照试剂盒的方法提取菌株总DNA作模板,使用通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCA
G-3′）和1492R（5′-ACGGCTACCTTGTTACGACTT-3′）,进行16S rDNA扩增,引物由上海立菲生物技术有限公司合成.PCR反应体系（30 μL）：2×Taq mix 15 μL,引物各0.5 μL,基因组DNA 1 μL,加水至30 μL.PCR反应程序：95 ℃ 5 min；94 ℃1 min；55 ℃ 1 min；72 ℃ 1 min；35个循环；72 ℃ 10 min,4 ℃保存.
扩增出条带后切胶回收并进行连接转化,将阳性克隆送去上海立菲生物技术有限公司测序.将所得序列和NCBI数据库中的序列进行Blast分析,利用Mega 5.0软件中的邻接法构建系统发育树[21-22].
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参考文献：
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