论文武汉地区奶牛粪便中高活性益生菌群筛选是适合奶牛论文写作的大学硕士及相关本科毕业论文，相关养20头牛国家补贴多少开题报告范文和学术职称论文参考文献下载。
摘 要：粪便处理问题已成为制约畜牧业发展的瓶颈,而发酵床饲养方式可有效地降解、消化家畜粪便.目前市场上生物发酵核心菌种多是高温菌种,由于高温发酵菌种受地域限制,特别是在武汉,夏季气温在35-40℃的天气长达30多天,湿度高达85-90%.给本来遭受热应激的奶牛增加排热负担,严重影响了奶牛的生产性能.本研究针对中部和南部地区的奶牛饲养现状,从本地牛粪菌群中筛选出在低温或中温条件下可以分解牛粪中N元素和纤维素的益生菌群,进行扩培,用于夏季奶牛生物床.
关键词：粪便；发酵床；筛选；高活性益生菌
一、材料与方法
1.菌种来源
本地牛粪腐殖质.
2.培养基的配制
培养基A：浓缩10倍的赫奇逊培养液.
培养基B：纤维素琼脂培养基.
培养基C：厌气性纤维分解菌培养基.
培养基D：好热（高温）纤维素分解菌培养基.
3.硅胶板的制备
用等体积的比重为1.1的盐酸和比重为1.09的硅酸钠溶液混合制作.
4.实验方法
（1）低温纤维分解菌的分离
接种：经紫外灭菌后的硅胶板,用无菌镊子取一张圆形无菌滤纸平铺在硅胶板上,吸取1ml浓缩的赫奇逊培养液将滤纸浸润,用灭菌的牙签或镊子将经2mm筛过的有机肥逐一排列在滤纸上,每个平板约放20-50粒（根据实验经验）,然后置于25-28°C温箱培养7-14天（注意：装平板的内容器内应放一杯水以便保湿）
菌落形态观察：培养7-10天后.有机肥周围开始出现有颜色的菌落,菌落逐渐扩展,经10-14天,周围滤纸被溶解,并出现粘液,这类菌落就是好气（低温）纤维粘菌,为黄色或橘黄色.
（2）厌气性纤维分解菌的分离
接种：取厌气纤维分解菌培养基,加入少量有机肥（腐殖质）或悬液1ml, 置28°C温箱培养10-14天.
检查：培养液地底部滤纸片上出现黄色、褐色斑点.取滤纸片涂片染色后镜检,可见到一端带芽孢的鼓槌状细菌,常见的有奥氏芽孢梭菌（Clostridium omelianskii）
纯化：用纤维琼脂平板,稀释平板法接种,经厌气培养,可得厌气性纤维分解菌的纯培养物.
（3）好热（高温）纤维分解菌的分离
接种：取好热纤维分解菌培养液,接入少量有机肥（腐殖质）或1ml悬液后,置55-60°C培养箱中培养10-14天.
检查：滤纸上有斑点,并被分解而断裂.在滤纸条分解区取生长物涂片、染色后镜检.经常可见大杆菌,有分解纤维素能力较强的嗜热纤维芽孢梭菌（Clostridium thermocellum）及芽孢杆菌.
纯化：用纤维琼脂平板,稀释平板法接种,经高温（55-60°C）培养,可得嗜热性纤维分解菌的纯培养物.
（4）益生菌菌株的鉴定
通过革兰氏染色、吲哚实验、葡萄糖酸盐氧化、葡萄糖产酸实验、接触酶实验、明胶液化等进行益生菌属的鉴定.按照《伯杰氏手册》（第八版）介绍的方法,进行糖发酵实验,完成益生菌种的鉴定.
（5）人工生物床的制作方法
将木屑垫和稻壳混匀后（按体积比等于3：1）的混合垫料分别装入直径50cm、高100cm的干净塑料桶中,装入深度为80cm,用手轻轻压平.称取占垫料质量20%（以后同）的新鲜牛粪于垫料中,充分搅拌均匀后,采用重量法调节水分,使其保持在45-50%之间.同时将不同的菌种按15%的比例接入上述人造垫料中,未接种对照组,实验组分别为短小乳杆菌组、蜡样芽孢杆菌组、低温复合菌和高温复合菌组.每个组3个重复.每天搅拌数次.30天后取样分析,每次取样同时调节垫料水分.
（6）纤维素分解率计算
将分离出来的菌种分别接种于装有50ml以滤纸为唯一碳源的发酵培养基中,28°C下振荡培养4d.纤维素分解率等于（对照样品纤维素×样品重量-残体纤维素重量×残体重量）/（对照品纤维素含量×样品重量）×100%
（7）pH值测定
称取干样10g,按样品：蒸馏水等于1：5（重量体积比）,加入50ml蒸馏水,振荡器上振15min后,过滤,用酸度计直接测定滤液pH值.每隔10天测一次pH值.
（8）无机氮测定
铵态氮采用靛酚蓝比色法测定；硝态氮采用还原比色法测定.
二、实验结果与讨论
1. 低温菌筛选结果
用方法1.4.1中的低温（好气）性纤维分解菌的分离方法筛选的菌种M1,它们在低温45°C条件下可以分解以滤纸和牛粪腐殖质为碳源和氮源的物质.经初步鉴定,M1由木霉（Trichoderma）F1和短小乳杆菌（Lactobacillus brevis）组成.
本研究结果表明,短小乳杆菌能够有效地利用牛粪中未被利用的N元素转化成无害的菌体蛋白.短小乳杆菌去除N元素的适宜条件为：水温25°C以上, pH<8.0,菌液使用量≤10 mg/L,亚硝酸盐本底质量浓度≤1.0 mg/L,有效处理时间为0-48 h.除了活菌体,短小乳杆菌的代谢产物也有利用N元素的能力.短小乳杆菌利用N元素的途径可能有三条,即分泌还原酶进行酶法去除亚硝酸盐而利用N元素,发酵产酸提高N利用率和自身吸收利用N转变为细胞有机N,但具体作用机理尚需作进一步研究.
2.好热纤维分解菌的分离结果
用方法1.4.3中的好热（高温）纤维分解菌的分离方法筛选出的混合菌M2.在分离出的几株高温菌中,菌体形态都呈杆状,在液体培养基中,活动性均较强,但分解纤维素能力略有异.经初步鉴定M2中富含纤维素分解菌木霉F2和蜡样芽孢杆菌 （Bacillus Cereus） .
总结:本论文可用于奶牛论文范文参考下载，奶牛相关论文写作参考研究。
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