论文响应面分析法优化枇杷叶多酚提取工艺是关于本文可作为相关专业响应面论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文响应面数据的一般规律论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
摘 要 以枇杷叶为试材,在单因素试验基础上,采用响应面分析法,建立料液比、乙醇浓度、提取温度和提取时间等4个因素影响枇杷叶多酚提取率的二次多项回归模型,并验证该数学模型的有效预测性.结果表明：料液比、提取温度、提取时间是影响枇杷叶多酚提取率的主要因素；随着料液比和提取温度的增加,枇杷叶多酚提取率呈先上升后下降的趋势,二者交互作用差异具有统计学意义.试验检验了枇杷叶多酚的最佳提取条件为：料液比1 ∶ 21（g ∶ mL）、乙醇浓度48.5%、温度60 ℃、浸提时间2.6 h,获得提取率为3.40%,该值和理论预测值3.44%接近,证明该模型可较好的指导枇杷叶多酚的提取条件.
关键词 枇杷叶；多酚；提取率；响应面分析
中图分类号 O657.63 文献标识码 A
枇杷[Eriobotrya japonica（Thumb.）Lindl.]别名卢橘,为蔷薇科枇杷属植物,因叶形似琵琶得名.中国是枇杷的主产地,其产量约占全世界总产量的67%.枇杷叶、花、果实都有极高的药用价值,可谓“周身遍是宝”,并且其营养价值也很高[1].常用作中药材的枇杷叶为枇杷的干燥叶,枇杷叶味苦,性微寒,归脾、肺经,具有清热止咳、降逆和胃的功效,特别是用于治疗肺热咳嗽、胃热呕逆等[2].据报道,从枇杷叶中已分离得到的有效成分主要有挥发油、三萜酸类、多酚类、黄酮类、倍半萜类、有机酸类等化合物[3].植物多酚具有很高的生物活性,拥有极强的抗氧化和抑菌能力[4],目前对枇杷叶的研究主要集中在三萜酸类化合物,但对枇杷叶多酚的报道比较少,为了更深入的研究枇杷叶多酚的生理活性,本研究利用响应面分析法优化枇杷叶多酚的提取工艺,达到节省材料,提高利用率的目的,以期对枇杷叶多酚的开发利用提供理论指导.
响应面分析（Response Surface Methodology,R ）是利用合理的试验设计,采用多元二次回归方程拟合因素和响应值之间的函数关系,通过分析回归方程来求得最佳工艺参数,以解决多变量问题的一种统计方法.和其它分析方法相比具有试验周期短,回归方程精确度高,能研究多因素间交互作用等优点[5].本实验在单因素试验的基础上,选取料液比、乙醇浓度、提取温度、提取时间4个因素进行Box-Behnken Design（BBD）优化枇杷叶多酚的提取工艺.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 植物材料 于2013年12月在福建省莆田市白沙镇山地果园,土壤为山地黄壤、偏酸性的枇杷种植基地,选择生长一致、管理水平相同的早钟六号枇杷（8年生）,随机采摘略带 的成熟老叶；经清水清洗,除去表面灰尘及杂物,然后置于50 ℃烘箱烘干（含水量低于1%）,粉碎后过60目筛,所得的枇杷叶粉末贮存于-20 ℃低温冰箱保存备用.
1.1.2 试剂和仪器 主要试剂：没食子酸（色谱纯,国药集团化学试剂公司）,福林酚试剂（国药集团化学试剂公司）,无水乙醇（分析纯）,无水碳酸钠（分析纯）,水为蒸馏水.
主要仪器：日本日立UV-2009型双光束分光光度计；EL204型电子天平,购自梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；101-0型电热鼓风干燥箱,购自天津市泰斯特仪器有限公司；Eppendorf 5810R台式高速大容量离心机；DK-S24型数显恒温水浴锅,购自上海精宏实验设备有限公司；FW177型中草药粉碎机,购自天津市泰斯特仪器有限公司.
1.2 方法
1.2.1 标准曲线的绘制 准确称取10 mg没食子酸标准品,定容于100 mL容量瓶制成0.1 mg/mL的没食子酸标准溶液,分别吸取100、200、300、400、500、600 μL标准溶液于10 mL容量瓶中,然后分别加入1 mL福林酚试剂和2 mL 15%的碳酸钠溶液,常温下避光反应2 h,在765 nm波长处测定样品的吸光值.以样品浓度为x轴,吸光值为y轴绘制没食子酸标准曲线（图1）.
通过线性分析得到回归方程,求的回归方程为：y等于0.127 2 x+0.052 4,其中x为没食子酸浓度,单位为mg/L,y为吸光度,R2等于0.998 8.
1.2.2 枇杷叶多酚的提取及含量测定 精密称取枇杷叶粉末,按照一定的料液比加入已知浓度的乙醇溶液中,置于一定温度的恒温水浴锅内加热提取,浸提结束后取上清液冷却,离心.将100 μL提取液定容至5 mL,避光静置1 min,准确吸取100 μL待测液,加入1 300 mL蒸馏水,混合均匀,然后加入200 μL福林酚试剂和400 μL碳酸钠溶液（质量分数为15%）,避光充分反应2 h,于765 nm处测定吸光值,根据回归方程计算枇杷叶多酚质量.每个实验做3次重复,取平均值.枇杷叶多酚提取率按下列公式计算：
多酚提取率/%等于×100
其中,y为吸光值；m为枇杷叶质量（g）.
1.2.3 单因素及其响应面优化试验设计 准确称取1.0 g枇杷叶粉末,在料液比、乙醇浓度（乙醇浓度为0%时的空白提取率为1.83%,远低于乙醇高浓度的提取率）、提取温度和提取时间等4个单因素条件下（表1）,确定提取因素的变化范围及各因素的适应值.将每次提取上清液离心、定容、避光反应,检测提取液中枇杷叶多酚的含量,并折算为得率.
在此基础上,根据Box-Behnken的试验设计原理,每个自变量取3个水平（依据单因素试验结果）,以-1、0、1进行编码,以枇杷叶多酚提取率为响应值.
1.3 统计分析
采用SPSS和Design Expert 8.0.6统计软件进行分析.
2 结果和分析
2.1 单因素对枇杷叶多酚的影响
料液比为1 ∶ 10～1 ∶ 20时,随着料液比的提高枇杷叶多酚溶出的更加充分,提取率也明显增加（图2-A）；当料液比达1 ∶ 20后,由于多酚已基本溶出,对提取率增加不大,为了节省原料,选择1 ∶ 20为佳.
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参考文献：
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