论文响应面分析优化明日叶多糖提取工艺是关于本文可作为明日叶方面的大学硕士与本科毕业论文明日草是个大骗局论文开题报告范文和职称论文论文写作参考文献下载。
摘 要 研究水溶醇沉法提取明日叶多糖的最佳工艺条件.应用Box-Behnken响应面分析法,以提取时间、提取温度及料水比为自变量,多糖得率为响应值,做三因素三水平的响应面回归分析.获得结论为：明日叶多糖水溶醇沉法提取的最佳工艺条件为：提取温度65℃,时间2.4h,料水比1：16,在此条件下多糖得率为26.37%.由此获得的明日叶多糖的最佳提取条件稳定可行.
关键词 明日叶；多糖；单因素试验；响应面分析
明日叶（Angelica keiskei）别名明日草、八丈草,原产地在日本八丈岛,属原生芹科多年生草本植物.因其生长快、生命力强,大有“今日摘叶,明日又长新芽”之势,故称“明日叶”.据日本大阪药科大学的权威专家马场贵美江教授等研究发现：明日叶具有抗衰老、抗溃疡、抗血栓、抗癌、降血压、降血脂、降血糖、降胆固醇的作用,并且能够改善胃肠道功能、改善睡眠、改善视力,提高人体免疫力[1].在对明日叶中的矿物质检测常见的钾、钙、镁、铁和锗,发现钙和铁的含量较高,钙的含量是这芹菜的3倍,铁的含量则要高出19倍[2].明日叶中还含有其它植物中少有的天然微量锗元素,虽然锗元素并未列入人体必需微量元素之列,但研究表明微量锗具有抗癌、抗突变、增强机体免疫力及消炎、镇痛、延缓衰老和免疫调节等作用[3].多糖是具有生物活性的大分子,国内外对于明日叶多糖的研究较少,本文主要研究明日叶多糖的提取工艺,这将为明日叶药用价值的开发提供理论依据.
1 材料、試剂及仪器
1.1 材料
明日叶为上海交通大学农业和生物学院食品科学和工程系王正武教授的明日叶生产基地赠送.
1.2 实验试剂
石油醚,AR,常熟市杨园化工有限公司；95%乙醇,AR,常熟市杨园化工有限公司；无水葡萄糖,AR,上海凌峰化学试剂有限公司；苯酚,AR,国药集团化学试剂有限公司；浓硫酸,AR,国药集团化学试剂有限公司.
1.3 实验仪器
FW-100高速万能粉碎机,北京中兴伟业仪器有限公司；PL203电子天平,梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；SHB-III循环水式多用真空泵,上海诚育仪器设备有限公司；HWS-24型电热恒温水浴锅,上海一恒科学仪器设备有限公司；TD5A-WS大容量台式离心机,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；UV-1800紫外分光光度计,日本SHIMADZU公司；NW超纯水系统,Heal Force；DHG-9240A电热鼓风干燥箱,上海一恒科学仪器设备有限公司；旋转蒸发仪,上海申生科技有限公司；ULT1386-3-V35超低温冰箱,美国赛默飞世尔科技.
2 实验方法
2.1 明日叶多糖的提取工艺
工艺流程：干燥明日叶片→粉碎→过筛（60目）→石油醚浸泡脱脂→95%乙醇溶液浸提除小分子杂质得到预处理干粉→水提取→旋转蒸发浓缩→加入95%乙醇溶液至溶液中乙醇浓度达到70%沉淀多糖→离心→用水复溶沉淀多糖→离心去蛋白→旋转蒸发浓缩→冷冻干燥→明日叶粗多糖.
2.2 明日叶粗多糖得率的测定：
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量是由Dubois等[4,5]提出的.取2mL明日叶多糖提取液在100mL的容量瓶定容.从稀释液中移取0.2mL,置于10mL试管中,加入0.4mL的5.0%（w/v）苯酚溶液后,迅速加入2.0mL的浓硫酸,混合均匀后,放置黑暗处静置30min.在波长490nm处测定吸光度,蒸馏水作为空白对照.通过吸光度值（A）及用改良的苯酚硫酸法[6,7]测葡萄糖后绘制的标准曲线,计算明日叶粗多糖溶液浓度（C）.
明日叶粗多糖得率的计算：根据葡萄糖标准曲线计算提取液中多糖的浓度.
多糖得率（%）等于（C*V*D/W）×100%
式中：C为提取液浓度（ug/mL）；V为提取液体积（mL）；D为稀释倍数；W为样品质量（g）.
2.3 明日叶粗多糖提取工艺参数优化
2.3.1 单因素实验设计方案
通过参考多糖提取工艺的文献,本文选取了提取温度、提取时间、料液比[8-10]三个因素,对明日叶的水提粗多糖作单因素试验.
2.3.2 提取温度对多糖得率的影响
称取4份2.0 g预处理后的明日叶干粉,放置于200mL烧杯.按料液比1：20的比例加入蒸馏水,分别在50℃、60℃、70℃、80℃水浴中浸提1h.用改良的苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,计算不同提取温度对明日叶多糖得率的影响.
2.3.3 提取时间对多糖得率的影响
称取4份2.0 g预处理后的明日叶干粉,放置于200mL烧杯.按料液比1：20的比例加入蒸馏水,在60℃水浴中分别浸提1h、2h、3h、4h.用改良的苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,得出不同提取温度对明日叶多糖得率的影响.
2.3.4 料液比对多糖得率的影响
称取4份2.0 g预处理后的明日叶干粉,放置于200mL烧杯.按料液比1：10、1：15、1：20、1：25的比例分别加入蒸馏水,在60℃水浴中浸提1h.用改良的苯酚-硫酸比色法测定多糖含量,得出不同提取温度对明日叶多糖得率的影响.
2.3.5 响应面分析法分析最佳工艺参数
响应面分析法（Response Surface Methodology, R ）是研究因素影响的重要函数估计工具,是将多因素试验中因素和响应面的相互关系用多元二次回归方程近似拟合,进而研究因素和响应面之间、因素和因素之间的相互影响关系.相比于正交试验设计法,响应面分析法耗时短,精度高,能研究多项因素间的交互作用[11].本文在明日叶粗多糖的提取工艺优化中采用了响应面分析法,得到了明日叶粗多糖的最佳工艺参数.
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参考文献：
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