论文生牛乳中金葡萄球菌分离鉴定和药物敏感性分析是关于葡萄球菌方面的论文题目、论文提纲、表皮葡萄球菌前列腺炎论文开题报告、文献综述、参考文献的相关大学硕士和本科毕业论文。
摘 要：采用金 葡萄球菌测试片快速筛选的方法,对采集于陕西省西安市和渭南市20份样品中S.aureus进行分离鉴定及药物敏感性研究,以了解此地区生牛乳中S.aureus的污染情况及对药物敏感性.结果表明：S.aureus测试片可用于大量生牛乳样品中S.aureus的初筛工作,方便且省力；S.aureus的检出率为10%；检出的两株S.aureus对青霉素都为耐药,其中一株对磺胺异恶唑也表现为耐药,两株S.aureus对复方新诺明、红霉素、万古霉素、氧氟沙星、克林霉素都表现为敏感.牛场应根据药物敏感性实时调整抗感染药物的使用方案.
关键词：金 葡萄球菌；分离鉴定；药物敏感性；生牛乳
中图分类号：S879.1
文献标识号：A
文章编号：1001-4942（2015）10-0092-03
金 葡萄球菌是一种常见的革兰氏阳性病原菌,是引起反刍动物 疾病最普遍的致病菌,主要表现为奶牛和羊的临床和亚临床 炎.据报道,在奶牛场中,临床型 炎的发病率为2%～8%,隐性 炎的发病率更高,这种牛生产的生鲜乳是易被S.aureus污染的食品原料,并且S.aureus能产生高温灭菌不能破坏的肠毒素,将会严重影响消费者的身体健康.因此,对生牛乳中S.aureus的研究尤其是检测非常重要.随着抗生素的广泛使用,S.aureus对目前使用的各种抗生素可能产生一定程度的耐药,给奶牛 炎的治疗带来一定困难,所以及时掌握S.aureus的耐药性情况是防治该病的关键.
本试验以生牛乳为原料,以S.aureus为研究对象,采用S.aureus测试片进行快速筛选的方法,研究生牛乳中S.aureus的分离鉴定及药物敏感性,旨在为生牛乳中S.aureus的分离鉴定及药物敏感性分析提供一种方便、省力的检测方法,为及时防止由S.aureus引起的食源性疾病提供可靠的技术支持,也为原料奶的安全生产提供科学依据.
1材料和方法
1.1材料
生牛乳：采自陕西省西安市和渭南市,共20份样品.将采集的生牛乳放入冰盒中保存,并在12h内分离样品；S.aureus测试片：购自北京良润生物科技有限公司；S.aureus标准菌株[CMCC（B）26003]：购自广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心；药敏测试盒：购白天津金章科技发展有限公司；API staph试剂盒、葡萄球菌试剂盒,购自法国生物梅里埃公司.
主要培养基：7.5%氯化钠肉汤、S.aureus显色培养基、哥伦比亚血平板培养基,均购自广东环凯微生物科技有限公司.
主要仪器：APILAB Plus系统（法国生物梅里埃）；生化培养箱（购自上海新苗医疗器械制造有限公司）.
1.2方法
1.2.1生牛乳在S.aureus测试片上初步筛选无菌操作取25mL生牛乳于225mL灭菌生理盐水中,混匀；取1mL均匀放于S.aureus测试片中进行初筛,37℃培养24h,有蓝色菌落生长为可疑阳性,没有蓝色菌落生长为阴性.同时设空白对照.
1.2.2菌株的分离纯化及鉴定 取下有S.aureus可疑阳性菌落的测试片,置于无菌7.5%氯化钠肉汤中,37℃培养24h.取一菌环肉汤划线于金 葡萄球菌显色培养基中,37℃培养24h,紫红色为可疑菌落.挑取紫红色可疑菌落,划线于哥伦比亚血平板培养基,37℃培养24h.从哥伦比亚血平板上取菌落做成0.5个麦氏浓度的均匀菌悬液,填充API试剂条中,37℃培养24h,加入APILAB Plus系统判读.
1.2.3药敏试验 采用微量肉汤稀释法,试验方法及结果判定按美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2015年标准进行.
2结果和分析
2.1生牛乳在S.aureus测试片上初步筛选结果
陕西省西安市和渭南市20份生牛乳在S.aureus测试片上培养24h后发现,有3份样品测试片出现蓝色斑点,判断为S.aureus阳性疑似菌落,菌落颜色明显,界线清晰,和空白对照和阴性测试片差异明显,筛查结果明显且直观,如图1所示.
2.2菌株分离及生理生化鉴定
将3份有可疑菌落的测试片进一步培养、分离、纯化,最终通过APILAB Plus判定为：S.aureus 2株,鉴定结果分别为：SX1%ID等于97.8%,T等于1.00；SX2%ID等于98.1%,T等于0.9；木糖葡萄球菌（S.xylosus）1株；S.aureus的检出率为10%.结果表明,取下阳性快检测试片后,采用和国标相同的培养基进行培养、分离、纯化,结果可以很好地满足生化鉴定的需要.
2.3药敏试验结果
采用目前国际通用的美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2015年标准规定的微量肉汤稀释法和结果判定方法,对分离得到的2株S.aureus进行药敏试验,结果见表1.表明,在7种抗生素中,两株S.aureus对青霉素及SX2对磺胺异恶唑表现为耐药,其他则表现为敏感.
3讨论和结论
生牛乳中S.aureus的筛选分离通常按照GB4789.10-2010的方法,先将所有样品富集培养,再在选择性培养基上进行分离鉴定,工作量大,消耗人力、物力多.何源等对重庆市生牛乳中S.aureus的污染状况调查、薛秀恒等对安徽生牛乳中S.aureus的污染状况调查均采用以上方法.本试验用S.aureus测试片进行初筛,培养的样品由20个减少到3个,减少了后续培养的数量；操作方法只是将1mL稀释10倍的样品加到测试片上培养即可,操作非常简便.该测试片对S.aureus的识别率为100%,对非葡萄球菌属的抗干扰能力良好.对葡萄球菌属的检测发现,测试片对木糖葡萄球菌的抑制率约为80%.所以测试片上显色的菌落仍需后续鉴定（以上数据由北京良润生物科技有限公司提供）.在本试验中经过测试片初筛后得到的3个可疑菌株最后有一株鉴定为木糖葡萄球菌,和北京良润生物科技有限公司提供的数据吻合.说明本测试片不会出现假阴性,但可能会有假阳性出现.因此,本测试片可用于大量生牛乳样品的S.aureus的初筛工作,以减少工作量.
世界范围内,该菌在生牛乳中的检出率有国家和地区的差异,检出率在12%～79%不等,本试验中生牛乳中S.aureus的检出率为10%,这和重庆市（24.67%）、安徽省（16.7%）的研究结果差异较大,说明不同地区生牛乳中S.aureus污染状况不同.林柏玲等研究发现,上海和天津两个城市牛乳中S.aureus污染情况相差较大（上海为0,天津为26.09%）,可能由于上海属于比较现代化的大都市,企业的生产管理制度均比较严格,牧场的生产条件和周边环境的要求较天津市高.这也说明只要对生产过程中每个环节进行严格监控,生牛乳的质量是可以得到保证的.
本试验中两株S.aureus对青霉素都为耐药,对复方新诺明、红霉素、万古霉素、氧氟沙星、克林霉素都为敏感,可能因为在奶牛场的养殖过程中青霉素长期单一使用.分离于不同奶牛场的S.aureus对所选7种抗生素的耐药性也不同,这和赵修龙等的研究结果一致,这主要和不同牛场的管理和预防性用药有关.本试验中复方新诺明、红霉素、万古霉素、氧氟沙星、克林霉素对两株菌都有良好的抗菌作用,建议用于此地区奶牛隐性 炎的防治.建议奶牛场建立细菌药敏动态数据库,根据药物敏感性,实时调整抗感染药物的使用方案,有针对性地选用药物,经常更换抗生素种类.
总结:该文是关于葡萄球菌论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
参考文献：
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