论文猪链球菌实验室分离和鉴定是关于本文可作为相关专业猪链球菌论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文人感染猪链球菌论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
摘 要：随着我国国民经济水平的进一步提高,人们对生活的质量以及健康的饮食也越来越关注了.但是近些年来,相关部门在对很多地区的规模猪场进行防疫检查,发现有很多猪身上都带有猪链球菌,如果这些生猪流入市场,被人们所食用的话,那么其后果将会是不堪设想的,下面就对猪链球菌进行分离的细菌进行实验鉴定,以此来保证人们的饮食健康.
关键词：猪链球菌；实验室；分离与鉴定
业内人士都应该知道,猪链球菌的危害是非常大的,而且其是一种人和兽可以共患的一种病原菌,在世界上的各个国家都有分布,从20世纪50年代以来,人们就一直受到猪链球菌的感染,不仅导致了大量猪的死亡,而且还深深的影响人们的生活健康.下面就对这种猪链球菌做进一步的实验分析,希望可以给临床的防制工作提供有价值的参考作用.
一、实验中所使用的材料和研究方法探析
1.1实验中所涉及到的材料病料
在实际的实验中,所选择的疑似猪链球菌病的病料,都是从广东省的广州,韶关,还有增城以及湛江等地一些比较有规模的猪场选择的,一共对这些疑似猪链球菌病的病料平均分成了20份,同时也分别标注了1到20号,这样在实验分析中会非常的方便.
1.2实验中都需要用到的仪器
主要有基因的扩增仪,是杭州的博日科技有限公司所生产的.还有型号是DYY-Ⅲ4的稳压稳流电泳仪器,其生产厂家是北京市的六一仪器厂.而型号为8823B的紫外线透射的分析仪,是生产于珠海的星马医学仪器有限公司生产.这些仪器通过相关部门的检测,都是完全符合其实验要求的,所以在一定的程度上,实验的结果是有保证的.
1.3实验中所应用到的试剂
主要有新生的牛血清,这种试剂是从北京的鼎国生物技术有限责任公司购买而来,还需要用到血平板试剂,以及一些可以用来对细菌微量进行生化反应的试管,同时还要用到托休二氏液体培养基以及托休二氏固体培养基,这些试剂都是从广东的环凯微生物科技有限公司购买而来的,因为这些都是比较知名的大企业,所以试剂的有效性是毋庸置疑的.
DNA提取试剂盒、DL2000DNA Marker,上海瑞齐生物科技有限公司提供.
1.4实验中所需要的引物
引物是在实验中比较关键的一个环节,所以对它的选择,一定是要根据猪链球菌二型的溶血素基因来进行确定的,这个引物最终是让上海的瑞齐生物科技有限公司,通过相关的人员,进行细致的设计合而成,它的上游和下游的引物序列（5’-3’）分别是CAGTATTTACCGCATGG-TAGATAT,GTAAGATACCGTCAAGTGAGAA,而使用的扩增片段的大小是294bp.
1.5实验中所使用的方法
在实验中,因为需要进行病原分离纯化和DNA的提取工作,所以选择用病猪的扁桃体来进行划线接种工作,位置就在血琼脂的平板上,在实验中需要把它放在37摄氏度中,然后进行二十四小时的培养工作,接着就可以把可疑的菌落接种到THB的培养液中,然后在37摄氏度的温度下进行振荡培养,时间在16到18个小时范围内,培养完之后,把培养后的可疑的菌落转种到THA的平板以及血平板上,再经过一定时间的培养后,把没有杂菌的菌落接种到THB的培养液中进行培养,其时间最好是在16到18个小时范围内.通过对数生长期的液体培养物,以及对DNA严格的提取,就可以得到所要得到猪链球菌的DNA,然后就是要对分离菌进行仔细的观察和培养,具体了解他的实际生长情况,接着还要挑取出平板上的单个可疑的菌落,以及液体的培养物作革兰氏染色镜检.
1.6实验中对PCR的检测工作
在对PCR进行扩增的工作中,大都是使用了25uL反应方法进行实验,实验过程中,首先要在反应管中,依次的加入10乘以PCR Buffer2.5UL,25毫摩每升的MgC122.0ul,以及2.5毫摩每升的dNTPs2.0uL,还有10毫摩每升的uL,所使用的引物分别是0.5uL,它的模板是1.0uL,实验中,把
所得到的PCR产物,用质量分数是1.5%的琼脂糖凝胶做电泳的分离工作,然后透过紫外的透射分析仪进行详细的观察,从而得到实验的结果.
振荡培养16-18h后,分别接种微量生化反应管
二、对猪链球菌的实验结果的分析
2.1病原分离纯化和实验结果分析
通过对所培养物的观察发现,其在THA琼脂的平板上不仅生长的情况良好,而且还可以形成圆形,或者是透明,闪光以及中央隆起的,而且表面还非常光滑的露珠形状的小菌落.这些物质在在血平板上,则会呈现出灰白色的,半透明状态或者是不透明状态,表面还非常光滑,有时候微微隆起的露珠状小菌落,有的菌落在它的周围,会形成1个2到4毫米宽,而且还完全透明或者是半透明状态的溶血环.在加入小牛血清的THB培养液中,基本上都会呈现出比较均匀,而且是浑浊的状态,这些小菌落有颗粒状的,还有粉状或者是絮状的沉淀,而且都没有菌膜,当它们静置后,在试管的底部就会形成沉淀,这些肉汤从而也就变得非常的清晰.
2.2对革兰氏染色镜检的实验结果分析
通过对实验的结果进行分析,发现分离的菌是革兰氏阳性,这种菌体会呈现圆形,也有一部分呈现双球形或者是短链的形状,在这种液体的培养物当中,其链比较长,而且在一般的情况下,都是由8到15个的球菌排成一个链状的,这种菌并没有鞭毛,也没有芽胞,而且自己还不能运动,没有荚膜,也没有粘液层,两极位置也没有着色的现象发生.
2.3对PCR检测结果的分析
通过实验,得出了两张图片,如下图的图1和图2.
这些菌落的阴性对照并没有出现条带,而且所实验的20株分离菌株,都可以扩增出和阳性对照相同的294bp条带,由此可以断定这20株的分离菌,它的检测结果都是呈现出了阳性.
总结：就目前而言,对猪链球菌的鉴定分析方法有很多种,但是都或多或少的存在一些的问题,但是使用双重荧光的PCR鉴定方法,就可以克服传统鉴定方法中所存在的缺陷,比如消耗的时间长,还有操作程序比较复杂等一系列的问题,为了保证实验结果的真实性和有效性,在这里还是建议大家在以后的相关实验中,还是使用几种方法同时实验为宜.
总结:本论文可用于猪链球菌论文范文参考下载，猪链球菌相关论文写作参考研究。
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