论文解磷细菌筛选鉴定与其在香草兰上的应用效果是大学硕士与本科香草毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写香草方面论文范文。
摘 要 香草兰为喜磷作物,施用解磷微生物可减少肥料施用量,促进作物生长.采用磷酸盐生长培养基从香草兰种植园中筛选到6株可解磷的细菌,通过NBRIP液体培养基摇床培养3 d后,菌株V-29培养液中可溶性磷含量最高,达到475.3 μg/mL.经16S rDNA分子鉴定该菌株为伯克霍尔德氏菌.通过温室盆栽试验研究了施用V-29及其制做到的微生物有机肥料在香草兰上的应用效果.结果表明：施用由解磷细菌制做到的微生物有机肥可显著提高香草兰茎蔓及根系干重,但单独接种解磷细菌处理与对照相比,差异不显著；施用微生物有机肥及接种解磷细菌均可提高土壤有效磷和植株全磷含量.
关键词 香草兰；解磷细菌；微生物有机肥；伯克霍尔德氏菌
中图分类号 S144；S573 文献标识码 A
香草兰（Vanilla planifolia Ames.）是兰科香草兰属热带藤本攀缘植物,具有“天然食品香料之王”的誉称.其鲜豆荚经过生香加工后含有250多种香气成分,香气独特,被广泛应用于调制各种高级茶叶、名酒和香水等,是各类高档食品和化妆品的配香原料,在国际市场上供不应求.香草兰在我国海南、云南和广东等热带亚热带地区均有种植,但热带亚热带地区降雨量较大,淋溶作用强烈,且土壤酸度较高,使土壤磷和施入土壤中的肥料磷绝大部分与铁、铝形成难溶性的铁磷和铝磷,甚至有效性更低的闭蓄态磷,难于被作物吸收利用.王华等[1]对海南省香草兰园主要种植区的种植园进行了养分测定分析,结果表明：香草兰种植园可被植物吸收利用的养分N、P、K、Ca、Mg均缺乏,其中有效态P缺乏最严重,且各养分之间比例严重失衡.香草兰是典型的喜磷作物,高产园植株体内磷含量显著高于低产园.
磷是作物生长必不可少的矿质营养元素之一[2],但土壤中大部分磷以闭蓄态或固定态存在,作物吸收利用率极低[3].解磷细菌可将土壤中固定态矿质磷转化成为可被作物吸收利用的有效磷,减少化学磷肥施用量[4-5].朱培淼等[5]从石灰性土壤中分离筛选到可解磷的高效菌株,土壤接种该菌株可促进苗期玉米生长.Hameeda等[6]从堆肥中筛选出5株解磷细菌,盆栽及大田试验均表明,接种这些解磷细菌可以提高玉米生物量.
本试验采用改良的NBRIP磷酸盐生长培养基从长势良好的香草兰种植园中分离筛选解磷细菌,并对其进行16S rDNA分子鉴定.通过盆栽试验研究解磷细菌及其经固体发酵制做到的微生物有机肥料在香草兰上的应用效果,旨在为利用有益微生物提高土壤中磷的有效性、减少化学磷肥施用量提供理论依据.
1 材料与方法
1.1 供试土壤样品及培养基
土壤样品采自连作香草兰园中长势良好的植株根际土壤,带回实验室4℃冰箱保存备用.
分离筛选培养基采用国际植物研究所磷酸盐生长培养基（NBRIP）[7]：葡萄糖10 g,磷酸铝3 g,氯化镁5 g,硫酸镁5 g,氯化钾0.2 g,硫酸铵0.1 g,蒸馏水1 000 mL,pH7.0,115 ℃高压蒸汽灭菌30 min,备用.
LB液体培养基：酵母膏5 g,蛋白胨10 g,氯化钠5 g,蒸馏水1 000 mL,pH7.0,121 ℃高压蒸汽灭菌20 min,备用.
1.2 方法
1.2.1 解磷细菌分离筛选 称取5 g香草兰根际土壤,放入250 mL装有45 mL无菌水的三角瓶中,置于28 ℃摇床中震荡30 min.上清土壤悬浊液依次稀释至10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,选取10-5、10-6、10-7浓度梯度,各取0.1 mL涂布至NBRIP选择性培养皿上,每个浓度重复3皿,置28 ℃培养箱中培养5 d.挑取有透明水解圈的菌落连续纯化5次以上,选择仍然有透明水解圈的单菌落4 ℃冰箱保存备用.
1.2.2 解磷细菌溶磷能力测定 将筛选到的解磷细菌接种至NBRIP液体培养基中170 r/min,28 ℃摇床震荡培养3 d,菌液8 000 ×g离心15 min,取上清液测定pH,适当稀释后,用钼锑抗比色法[8]测定上清液中的可溶性磷.
1.2.3 解磷细菌的16S rDNA分子鉴定 菌体基因组DNA的提取参照文献[9]的方法.细菌16S rDNA的PCR扩增采用通用引物：正向引物（对应于E. coli的16S rDNA 5′端8-27f位置）：5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′,反向引物（对应于E. coli的16S rDNA 5′端1523-1540r位置）：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′.
PCR 反应体系为：DNA模板1 μL,dNTPs Mixture（2.5 mmol/L）4 μL,引物（1 mmol/L）各1 μL,10×Buffer（缓冲液）2.5 μL,Taq酶（5 U/μL）0.2 μL,加超纯水（ddwater）至25 μL.PCR反应条件：94 ℃预变性5 min,进入热循环,94 ℃变性30 s,55 ℃退火35 s,72 ℃延伸1 min,35个循环,延伸8 min.PCR产物经试剂盒纯化后测序.将测序所做到基因序列在RDP数据库中进行对比分析,选取同源性高的相关序列采用MEGA 4.1软件进行比对分析,用邻接法构建进化树.
1.2.4 盆栽试验 将解磷菌株接种至LB液体培养基中,摇床培养48 h,10 000 ×g离心菌体10 min,倒掉上清液,菌体用无菌水悬浮.按照10%（V/m）的比例接种至牛粪有机肥中,搅拌均匀,用水调节肥料含水量至40%～45%,置于温室发酵5 d,每天翻动肥料1次,即为微生物有机肥料.
供试土壤为砂壤土,养分含量为全氮0.58 g/kg,速效磷7.10 mg/kg,速效钾94.08 mg/kg,有机质12.67 g/kg.供试牛粪有机肥养分含量为全氮0.8%,全磷0.6%,全钾0.2%,有机质19.4%.试验盆钵采用周转箱（内尺寸600 mm×420 mm×165 mm）,每盆装土10 kg.选取长势一致的健康香草兰作为供试苗.
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参考文献：
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