论文凤凰单丛茶树资源遗传多样性ISSR分析是关于对写作茶树论文范文与课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文茶树精油的功效与作用论文开题报告范文和相关文献综述及职称论文参考文献资料下载有帮助。
摘 要 采用ISSR分子标记技术对48份凤凰单丛茶品种（系）进行了遗传多样性分析.选用10个多态性高、分辨力强的ISSR引物分别对供试材料基因组DNA进行扩增,共获得121个位点,其中多态位点带98个,多态位点比率（PPB）为81.0%.品种（系）之间的遗传相似系数变化范围在0.590 9～0.967 4之间.UPGMA聚类分析结果表明,在GS值为0.792的水平上供试材料可划分为7大类,其亲缘关系远近和地理来源关系不大且和香味类型没有必然的联系.
关键词 ISSR分子标记；凤凰单丛茶；遗传多样性
中图分类号 S571.1 文献标识码 A
Abstract ISSR molecular markers were used to analyze the genetic polymorphism of 48 Fenghuang-Dancong tea plant germplasms. Using 10 primers, we amplified 121 bands, of which 98 bands are polymorphic, and the average percentage of polymorphic bands was 81.0%. The genetic similarity among all the tested tea plant germplasms ranged from 0.590 9 to 0.967 4. Based on the genetic similarity and the UPGMA cluster, all the 48 accessions were clustered to 7 groups on the genetic similarity level of 0.792. The dengrogram indicated that the genetic of 48 tested tea plant germplasms had no certain relation with the geographical origin and aroma type.
Key words ISSR markers； Fenghuang-Dancong Tea； Genetic diversity
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2015.03.009
凤凰单丛茶属乌龙茶类,产于“中国乌龙茶之乡”的广东省潮安县凤凰镇,由茶农历代沿习单株优选、单株培育、单株采制的传统栽培方式和独特的加工工艺制作而成的具有天然花香和特殊韵味品质的乌龙茶,现已形成了具有区域特色的品种（系）体系,享有“中国的国宝”之美誉[1].茶业产量及品质提高依赖于茶树优良品种的选育,而凤凰单丛品种（系）资源繁多,且主要以香型为主线将其归类,存在同一香型中包含多个品种（系）,同型品种（系）间的品质参差不齐的现象,加之茶树通常是通过杂交育种,从而使各品种（系）之间的亲缘关系混乱,本底不清,遗传背景不明确,极大地妨碍了品种（系）之间的亲缘归类、育种亲本的选配和种质资源的创新和利用.
ISSR（Inter-Simple Sequence Repeat）是一种以基因组中常出现的SSR本身设计成锚定引物为单引物并基于PCR技术的简单序列重复区间扩增多态性分子标记,具有无需预先知道基因组序列信息、快速、稳定、多态性丰富、重复性强及成本低等优点[2].该技术广泛应用于植物的种质资源鉴定和亲缘关系分析,在茶树种质资源上的应用也有相关报道[3-8].本研究利用ISSR分子标记技术,从DNA分子水平对所收集的48份凤凰单丛茶树品种（系）进行遗传多样性及亲缘关系研究,为凤凰单丛茶树品种（系）的亲缘归类、保护及利用提供参考依据.
1 材料和方法
1.1 材料
供试的48份凤凰单丛茶树样品及来源详见表1.取一芽两叶置于盛有硅胶的封口袋中,-20 ℃保存备用.ISSR引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成,Taq聚合酶、dNTPs等购自大连宝生物TaKaRa公司.
1.2 方法
1.2.1 DNA的提取 参照Sue Porebski[9]、陈昆松[10]的方法,采用改良的CTAB（2% β-巯基乙醇、3%聚乙烯吡咯烷酮）法进行基因组DNA提取.
1.2.2 ISSR-PCR扩增和产物检测 ISSR-PCR扩增反应在TaKaRa TP600梯度PCR仪上进行,经过比较和优化,确定反应体积为20 μL,PCR组分如下：2 μL 10×PCR buffer、40 ng/μL模板DNA、150 μmol/L dNTPs、1.5 mmol/L MgCl2、引物0.3 μmol/L、1.0 U Taq酶.扩增程序为：94 ℃预变性7 min；94 ℃变性1 min,特定温度退火45 s,72 ℃延伸120 s,38个循环；最后72 ℃延伸10 min.扩增产物用含有0.5 μg/mL EB的1.8%琼脂糖凝胶（1×TAE缓冲液）以5 V/cm电泳3 h,电泳结束用VILBER LOURMAT公司凝胶成像系统照相并保存.
1.3 数据处理
对保存的图片进行人工方法读带,将电泳图上可重复的、清晰的条带赋值为“1”,同一电泳迁移位置无带或不易分辨的弱带赋值为“0”,建立原始数据矩阵.使用NTSYspc2.10e软件,根据Nei等[11]采用DICE系数计算供试材料间的遗传相似系数,并按SAHN邻接法对供试材料进行UPGMA遗传相似性聚类分析,并绘制树状聚类图[5].
2 结果和分析
2.1 ISSR扩增产物多态性
从103条ISSR引物中筛选出10条能在特定的退火温度下扩增条带具有多态性高、重复性强、背景清晰的引物用于ISSR-PCR反应,10条引物共扩增出121个位点,其中多态性位点数为98个,平均多态性位点百分率（PPB）为81.0%（表2）.不同引物扩增的位点数7～15个不等,平均每个引物扩增12.1个位点和9.8个多态位点,多态位点百分率最高为92.3%,最低为70%（表2）.扩增产物片段大小介于250～2 000 bp之间,图1为引物UBC880扩增的结果.
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参考文献：
1、 芦笋种质资源SRAP遗传多样性分析 摘要：为了更深入地揭示芦笋品种（系）的遗传多样性，本研究采用SRAP技术对国内外12个芦笋栽培种和杂交种的遗传多态性进行分析。结果表明，从170。
2、 南瓜种质资源遗传多样性SRAP分析 摘 要 本研究应用SRAP分子标记技术对所收集的85份南瓜资源进行亲缘关系分析，从100对引物中挑出17对引物对其进行条带扩增。结果表明：共获得。
3、 46份大白菜种质资源SSR标记遗传多样性分析 摘 要：利用30对SSR引物分析了46 份大白菜品种的遗传多样性。结果表明，30对引物共检测到170个多态性位点，平均每对引物检测到5 667个。
4、 基于AFLP标记黄河三角洲中国柽柳种质资源遗传多样性分析 摘要：为了解黄河三角洲地区分布的中国柽柳单株间的遗传关系，利用AFLP 分子标记技术对黄河三角洲滨海地区天然分布的60个中国柽柳优良单株的遗传多。
5、 云南景洪市野生古茶树低资源筛选 摘要：以云南景洪49株野生古茶树资源为材料，采用高效液相色谱法测定茶叶中的咖啡碱（CAF）含量，用儿茶素总量、茶多酚和氨基酸含量3个生化指标对低。
6、 基于SRAP分子标记23株大球盖菇遗传多样性和亲缘关系分析 摘要：利用相关序列扩增多态性（sequence-related amplified polymorphism，SRAP）分子标记对国内外不同来源。