论文基于量子点荧光探针的高灵敏蛋白质检测方法是关于本文可作为相关专业荧光探针论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文荧光探针论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
摘 要：通过制备量子点荧光检测探针,构建了一种基于量子点探针和免疫磁珠的蛋白质检测方法,实现了对蛋白肿瘤标志物癌胚抗原（carcinoembryonic antigen, CEA）的高灵敏定量检测. 在该检测体系中,若存在有靶标蛋白,其与量子点检测探针以及捕获探针之间会发生免疫反应形成三明治结构,利用磁力分离器对免疫复合物进行富集后,通过检测富集在磁珠表面的量子点荧光信号,可实现对靶标蛋白的定量. 该方法的检测灵敏度为38 pg/mL,线性范围为0.39～50 ng/mL,临床质控样本检验结果表明,该方法准确度高,可重复性好,可应用于临床样本检测. 该量子点探针检测体系具有灵敏度高、特异性好、样品消耗量低等优点,在疾病早期诊断方面具有广阔的应用前景.
关键词：量子点；免疫荧光分析；免疫磁珠；肿瘤标志物
中图分类号：N39；Q71；R730.45文献标识码：A
DOI：10.3969/j.issn.1000-5641.2016.02.016
Abstract：In this study, based on the unique properties of quantum dots （QDs） and immune magnetic beads, an fluorescent assay was built to detect low concentration carcinoembryonic antigen （CEA）. The assay was carried out in a sandwich formation in which two antibodies simultaneously recognized two separate binding sites on the same target CEA. After enrichment with magnetic separator, the fluorescent intensities produced by the QDs, which were confined to the surface of the beads, could be read efficiently to quantify the concentration of the CEA. For this assay, the limit of detection was 38 pg/mL with the linear range was from 0.39 to 50 ng/mL, and it has been proved with high accuracy and repeatability in tumor marker control. With the high sensitivity, specificity and low sample consumption, this method takes a big step to the early diagnosis of diseases.
Key words：quantum dots；immunofluorescence assay；magnetic beads；tumor marker
0引言
肿瘤标志物的高灵敏度检测对于癌症的早期预警及其监测具有十分重要的意义[1]. 研究表明,随着癌症的发生与发展,血清等体液中蛋白质等肿瘤标志物的含量会增加. 通过分析正常个体与癌症患者之间存在差异的化学类物质的种类和含量,分子筛查能够较形态学方法更早地检测到肺癌的发生与发展[2-3]. 故而,发展准确简便的蛋白质定量方法应用于肿瘤早期检测对降低癌症死亡率具有重大意义.
量子点作为一种新颖的半导体纳米材料,所表现出来的独特光学特性、理化性质以及生物相容性,使其迅速成为一种备受瞩目的荧光标记物,被广泛应用在生物成像、核酸和蛋白质检测等方面[4-7]. 随着量子点合成、制备工艺的发展,目前可以获得量子产率高达90%的量子点,另外,量子点还具有大的摩尔消光系数（105～107 mol-1·cm-1）[8],这使得其具有传统荧光染料难以比拟的强荧光性[9-10]. 除此之外,量子点还具有吸收谱宽、发射谱窄（半峰全宽约为25～35 nm）、斯托克斯位移宽、光稳定性好、抗光漂白能力以及抗化学试剂淬灭能力强等特点. 这些性质都使得量子点成为优异的荧光示踪物,将其应用于免疫分析不仅能够实现检测灵敏度的大幅提高,而且由于量子点具有发射波长随尺寸可调的特性,因此还具备拓展到多通道、多指标同步检测的能力[11-12].
近年来,利用磁性微球作为固相载体设计免疫检测的方法倍受青睐,这主要归功于磁性微球独特的物理化学性质[13-15]. 首先,磁性微球具有高的体表比,丰富的表面活性基团以及良好的生物相容性,能够和DNA、酶及抗体等生物物质偶联,易于实现生物功能化；其次,磁性微球具有好的稳定性,能耐受一定酸碱度的溶液,这使其能够应用在多种反应中；再次磁性微球的悬浮稳定性好,能够均匀分散在液相溶液中,为免疫识别提供了优异的反应微环境,故而能够获得更优异的动力学表现；不仅如此,因其具备的超顺磁性,可以简便高效地实现与其他物质的分离与纯化.
本研究通过对磁性微球进行功能化制备成捕获探针,将量子点作为示踪物标记在检测抗体上形成检测探针,以癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen,CEA）为靶标物质[6],构建了一种新型蛋白质荧光免疫分析方法. 当靶标CEA存在时,会发生免疫识别反应形成免疫夹心结构磁珠—抗体—抗原—抗体—量子点,通过对被限制在磁性微球表面的量子点进行荧光成像分析,可实现对CEA的高灵敏的检测. 该方法不仅特异性好、检测范围宽,而且操作简便、样品消耗量低、设备要求低,极具临床应用前景.
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参考文献：
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