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摘 要：抗性筛选是农杆菌介导的花生遗传转化过程中不可或缺的步骤,但是抗生素的使用对花生组培苗的生长和生根有着显著影响.为了明确抗生素对花生组培苗生根的敏感质量浓度,本试验以花生栽培品种丰花1号组培苗为材料,在培养基中添加不同浓度的头孢霉素和卡那霉素,检测花生组培苗的生根率及植株生长状况并进行统计分析.结果表明：0～250 mg/L的头孢霉素对花生组培苗生根及植株生长基本无影响.卡那霉素对花生组培苗生根影响较为显著,0～10 mg/L卡那霉素对花生组培苗生根和生长基本无影响,10 mg/L卡那霉素条件下组培苗不长侧根,15 mg/L卡那霉素显著抑制根的伸长；切去不生根的组培苗底端后移入MS培养基又能重新生根,不切去底端的组培苗则不生根.经过75 mg/L卡那霉素筛选的抗性组培苗的生根率可达31%.本研究可为花生遗传转化后期根的诱导提供一定的理论支持.
关键词：头孢霉素；卡那霉素；花生；组培苗；生根率；遗传转化
中图分类号：S565.201 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）08-0033-05
Abstract Resistance screening is an indispensable step in Agrobacterium mediated genetic transformation of peanut, but the use of antibiotics have significant influence on peanut seedling growth and rooting. In order to make clear the sensitive concentration of antibiotics on rooting of peanut seedlings, the peanut cultivation variety Fenghua 1 tissue culture seedlings were used as experimental materials, and the culture media with different concentrations of kanamycin or cefotaxime were used to detect the peanut seedling rooting rate and growth status. The results showed that 0～250 mg/L cefotaxime had little effect on peanut growth,while kanamycin had significant effect on peanut seedling rooting. 0～10 mg/L kanamycin has no obvious effect on peanut seedling rooting and growth, but under the condition of 10 mg/L kanamycin, the seedlings had no branch roots, what’s more, 15 mg/L kanamycin significantly inhibited the elongation of roots. When the rootless plantlets were transfered into MS medium after cutting off the bottom of the seedlings, the roots grew out again, whereas the rootless plantlets did not grow roots if not cutting off the bottom. After screening with 75 mg/L kanamycin, the rooting rate of the kanamycin-resistant tissue culture plantlets could reach 31%. This study could provide certain theoretical supports for roots induction during the late stage of peanut genetic transformation.
Keywords Cefotaxime； Kanamycin； Peanut； Tissue culture seedling； Rooting rate； Genetic transformation
花生（Arachis hypogaea L.）是世界主要油料作物之一,種植地区主要分布在亚洲、非洲和美洲.中国是花生生产和消费第一大国.花生油脂含量高达50%,和其它油料作物相比,在含油量、单产、单位面积产油量等方面均具有一定优势[1].
基因工程为花生遗传改良提供了新的手段,可以通过外源基因导入及遗传调控技术提高花生的抗逆性和改良花生的营养品质[2-4].花生常用的转化方法主要有三类：一是基因枪法转化胚性愈伤组织,通过体胚发生途径分化再生；二是农杆菌介导转化胚小叶、子叶（节）或胚轴外植体,通过体胚发生或器官发生途径分化再生；三是农杆菌介导转化茎尖外植体,直接发育成苗[5,6].其中农杆菌介导转化法以其方法简单、效率高、拷贝数少等优点成为重要的、行之有效的方法之一[6].
在花生阳性遗传转化植株筛选阶段,污染是经常发生的一种现象.污染包括真菌污染和细菌污染.真菌污染主要是孢子生长,污染后不易抑制应及时淘汰；细菌污染菌落吸附在培养基表面,可以通过抗生素进行抑制[7].植物材料受农杆菌浸染后,经过一段时间的共培养,需要用抗生素及时有效地杀死或抑制细菌,以防止细菌危害植物组织并影响植株再生.常用抗生素为头孢霉素和青霉素[8,9],后期还会利用卡那霉素等抗生素进行阳性苗筛选,但是向培养基中加入抗生素势必影响植物组织的正常生长和分化[10,11].因此,研究抗生素对花生组培苗生根以及植株生长的影响,确定抗生素的适用范围和使用量,对优化花生遗传转化过程、提高遗传转化效率具有重要意义[12].该试验旨在研究不同浓度头孢霉素和卡那霉素对花生组培苗生根及植株生长的影响,以期为提高花生组培苗的生根率提供有力依据.
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参考文献：
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