论文三种细胞计数法对比试验是适合不知如何写细胞方面的相关专业大学硕士和本科毕业论文以及关于癌细胞最怕什么论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料下载。
摘 要：细胞数目是判断细胞生长状况的重要指标之一,如何实现细胞数目的快速、准确统计是细胞实验中最常遇到的问题.本文采用细胞计数板法、细胞计数仪法及流式细胞仪法对小鼠颅顶前骨细胞（MC3T3-E1）及人支气管上皮细胞（HBEC）的计数效果进行对比,并分别对这两种细胞的生长曲线进行了绘制.通过对比发现细胞计数仪法是一种快速、准确、成本适中的计数方法.
关键词：细胞计数板；细胞计数仪；流式细胞仪；细胞生长曲线
中图分类号：Q2-33 文献标识码：A 文章编号：1007-3558（2016）06-0079-03
Abstract： The number of cells is one of the most important indicators to determine cell living conditions. In this paper, three different methods were used to detected the number of osteoblast cells（MC3T3-E1）and human bronchial epithelial cells（HBEC）. The results of variable coefficient, testing time and growth curve of two kinds of cells were compared. The conclusion indicated that the cell counter method is a good way to get cell numbers.
Key words： cell count plate； cell counter； flow cytometry； cell growth curve
一、前言
体外细胞培养过程中的定量对于分析细胞的生长特性、探索最佳传代培养条件十分重要.在定量过程中,细胞计数是判断细胞增殖水平的重要手段,也是科研工作中判断细胞生长状况的重要指标[1-2].目前实验室中常用的细胞计数法是细胞计数板法,细胞计数板法是通过显微镜计数细胞计数板上的细胞来实现的,这种方法简单、廉价,但是计数结果容易受到操作细节的影响,费时费力[3].为简化实验流程,各种各样的细胞计数仪应运而生,这些细胞计数仪大都具备操作简单,省时,计数结果稳定等优点[4].流式细胞仪也具备快速定量的特点,目前主要应用在细胞周期、细胞凋亡、细胞分选等方面,但鲜有细胞计数方面的研究[5].
因此,本文利用实验室现有条件,通过细胞计数结果的误差率分析、计数时间及小鼠颅顶前骨细胞（MC3T3-E1）和人支气管上皮细胞（HBEC）的生长曲线的绘制这三方面来比较细胞计数板法、细胞计数仪法及流式细胞仪法的细胞计数效果,探索哪种方法更适合用于细胞计数.
二、实验材料和方法
(一)实验材料
小鼠颅顶前骨细胞（MC3T3-E1,西北工业大学惠赠）,人支气管上皮细胞（HEBC,中南大学惠赠）,DMEM培养基（D5648,Sigma-Aldrich 公司）、α-MEM培养基（11900-024,赛默飞世尔科技）、胎牛血清（900108,Gemini生物制品）、胰酶（25200-072,赛默飞世尔科技）、移液器（Research plus,艾本德中国有限公司）、血细胞计数板（上海求精生化试剂仪器有限公司）、倒置顯微镜（Primo Vert,蔡司中国）、细胞计数仪（Jimbio CC,江苏卓微生物科技有限公司）、流式细胞仪（ACCURI C6,美国BD公司）等.
(二)实验方案
1.细胞计数板、细胞计数仪及流式细胞仪的计数效果对比
采用三种方法对同一种样本（HBEC）进行计数,分别计数6次,求出各自的变异系数并比较.
2.细胞计数板、细胞计数仪及流式细胞仪的计数时间对比
采用三种方法对同一种细胞（MC3T3-E1）进行计数,分别计数3次,得出不同计数方法的计数时间的平均值并比较.
3.三种方法绘制MC3T3-E1的细胞生长曲线
将MC3T3-E1按照5×104 个/mL的密度接种到30个35 mm的培养皿中,每个培养皿中含有2 mL的细胞悬液,每天取3个培养皿进行胰酶消化,随后加入完全培养基（10%胎牛血清）进行中和,充分吹打后分别得到MC3T3-E1的单细胞悬液,分别用三种计数方法对单细胞悬液进行计数,三种计数方法的上样量均为10 μL,取3个小皿的计数结果的平均值进行记录.其余未计数培养皿按照2 天/次的频率进行换液.
4.三种方法绘制HBEC的细胞生长曲线
采用相同的方法绘制HBEC的细胞生长曲线,并将两种不同细胞的生长曲线进行比较.
三、实验结果和讨论
（一）三种不同方法对HBEC单细胞悬液进行计数的误差率分析
采用三种不同方法对HBEC单细胞悬液进行计数的误差率分析如表1所示.
表1的计数结果表明,细胞计数仪的计数结果和细胞计数板的计数结果相近,而采用流式细胞仪进行计数的结果要大于细胞计数仪和细胞计数板的计数结果,这可能由于流式细胞仪的灵敏度比较高,某些细胞碎片或其他物质被反应到计数结果中.同时也可以看出流式细胞仪、细胞计数仪的变异系数相对较小,而采用血细胞计数板的变异系数较大,说明人工计数由于受人员、操作等各方面的影响而相对不稳定.
(二)三种方法的计数时间对比
表2的测试结果表明,在细胞接种后生长初期,细胞量较少时,除去必要的开机、准备时间外,三种计数方法的计数时间比较接近,但当细胞处于生长对数期的中后期时,采用细胞计数板法进行细胞计数的时间明显比其它两种方法的计数时间长.
(三)MC3T3-E1及HBEC细胞生长曲线的绘制
通过图1和图2的对比可知,细胞计数板法、细胞计数仪法及流式细胞仪法得到的细胞生长曲线的趋势比较一致,其中采用流式细胞仪进行的细胞计数结果最高,采用细胞计数板法及细胞计数仪法得到的计数结果类似,这可能是由于流式细胞仪比较灵敏的原因.另外,从图中可以看出不同细胞的生长曲线略有不同,HBEC细胞较早的进入细胞生长的平台期,这可能是因为不同细胞的生长特性不同导致的.
四、结论
本文从细胞计数结果的误差率分析、计数时间及不同细胞的生长曲线的绘制这三方面对细胞计数板法、细胞计数仪法、流式细胞仪法的计数效果进行了比较.实验结果表明,细胞计数板法计数结果比较准确,但计数结果稳定性差,当细胞数目较多时计数耗时最长；细胞计数仪法计数结果比较准确,计数结果稳定性较好,计数时间最短；流式细胞仪法计数结果偏大,计数结果稳定性最好,计数时间较短；以上三种方法得到的不同细胞生长曲线的趋势基本一致.另外,采用细胞计数板法计数成本最低,细胞计数仪法计数成本次之,流式细胞仪法计数成本最高.综合以上分析可知,细胞计数仪法是一种比较准确、可靠、省时、成本适中的计数方法.
参考文献：
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[3]侯建军, 黄邦钦, 戴相辉. 赤潮藻细胞计数方法比较研究. 中国公共卫生, 2004, 8, 7-8.
[4]陈晖. Countstar自动细胞计数仪和传统酵母计数方法的对比试验研究. 啤酒科技, 2015, 4, 41-44.
[5]应用流式细胞仪进行CHO细胞计数及存活率计算. 化学和生物工程, 2012, 29, 71-74.
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参考文献：
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